為什麼要做抗原修復?

福馬林的主要成分甲醛會使蛋白質的結構產生醛基的鍵結,有資料稱為Cross link 或Mask,這需要做適當的抗原修復如:酵素處理、不同的鹽離子高溫溶液等...,一般石蠟切片都會需要做抗原修復,當然有些時候不做修復也能做IHC。

至於冷凍切片如果組織沒有經過Formaldehyde or paraformaldehyde的固定,就不需要做抗原修復,相反如果有,那麼需要考量固定液的種類、作用時間與溫度,再來做抗原修復,一般來說強度會比石蠟切片弱,但固定的時間越久需要修復的強度也就越高,這樣冷凍切片做IHC成功的機會也就能高一些。

YouTube 影片-Standardized HIER Protocol using Trilogy


Trilogy™ 三合一抗原修復液
 
脫蠟、回水、抗原修復同時完成


產品說明:

無毒性溶液,可取代二甲苯(脫蠟)及漸降系酒精(回水)等步驟,減少二甲苯與酒精對您的危害,可以同時間脫蠟、回水、抗原修復的三合一免疫染色前處理試劑。

使用步驟:

1. 切3-4μm的組織切片並將其放置在黏玻片上,烘片60度30分鐘或37度overnight 使組織完全黏附在玻片上。

2. 玻片60度預溫10分鐘後,置入含1X Trilogy溶液100 ml的耐高溫高壓染缸內。

3. 另外準備一缸1X 100 ml的Trilogy並倒入耐高溫高壓染缸內,這將作為第一缸作用處理後再洗淨用,以確保完全去除
組織上的蠟。

4. 將700毫升的水,加入抗原修復鍋的外鍋,兩個耐高溫高壓染缸都放入鍋內,鍋蓋旋轉至正確位置,並確保壓力閥對
準白點,否則將無法產生壓力,操作控制面板,設置壓力模式為〝High pressure〞,設定時間10~20分鐘(建議15分
鐘), 然後按下〝Start〞。

5. 抗原修復鍋加溫加壓需15分鐘,當到達正確的壓力和溫度後紅色浮球升起,計時器才開始倒數,完成後計時器歸零並
有嗶嗶聲響(聲音不大須另設Timer),再按一次〝Start〞關閉電源。

6. 解除壓力-將壓力閥撥至洩壓位置,壓力釋放約需1分鐘,待紅色浮球降下後,表示壓力下降至安全狀態,才可以打開
蓋子。

7. 將兩缸染缸移出,染架shaker 30次後,從原本染缸快速移至第二個預熱的染缸,再shaker 30次後浸泡10分鐘,第一
缸溶液必須丟棄,第二缸則可以回收,並當作下一次三合一步驟的第一缸使用。

8. 以TBST清洗5分鐘,接著進行免疫組織化學染色步驟Blocking Endogenous Peroxidase。