免疫染色步驟與方法

下列是蠟塊切片的IHC建議操作流程，如果有任何問題歡迎您隨時來電。

所需器具及試劑:

染缸數個、二甲苯、漸降(升)系酒精、待測玻片、抗體、抗原修復液、抗原修復鍋、染色盤、耐溫耐壓染缸、

PBST 或TBST、免疫染色用筆、Detection Kit (Thermo Quanto Detection system)、蓋玻片、封片膠。

IHC 建議流程:

1. 組織脫蠟- 二甲苯2缸，各10 min。

2. 組織回水-(漸降系酒精)100％酒精→ 95％酒精→ 80％酒精→ 70％酒精→ 水洗，每缸各3 min。

3. 使用抗原修復鍋做抗原修復，修復時間約10~20 min。

4. TBST(或PBST以下皆同)，清洗時間5 min。 ⇦⇦⇦⇦⇦冷凍切片由此步驟開始

5. Hydrogen Peroxide Block，作用時間10 min。

6. TBST 2缸，清洗時間各5 min。

7. Protein Block，作用時間10 min。

8. TBST 2缸，清洗時間各5 min。

9. Primary antibody，作用時間約30 min (請注意時間、濃度依抗體而不同，須參考datasheet)。

10. TBST 2缸，清洗時間各5 min。

11. Primary Antibody Amplifier (Quanto)，作用時間10 min。

12. TBST 2缸，清洗時間各5 min。

13. HRP Polymer (Quanto)，作用時間10 min。

14. TBST 2缸，清洗時間各5 min。

15. DAB Chromogen:Substrate = 1:30，呈色時間約1~3 min。

16. 自來水洗5 min。

17. Hematoxylin，對比染色時間1~5 min (視喜好顏色深淺，可自行調整)。

18. 自來水洗10 min。

19. 甩掉玻片上水份，以(漸升系酒精脫水)80％酒精→ 95％酒精→ 100％酒精→ 100％酒精，每缸各5 min。

20. 浸泡二甲苯2缸，各5 min。

21. 封片。